判斷細(xì)胞是否被污染可以從以下幾個方面入手：
一、肉眼觀察
1. 培養(yǎng)基外觀
  - 渾濁度：正常的細(xì)胞培養(yǎng)基是澄清透明的。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得渾濁，這是細(xì)胞可能被細(xì)菌污染的一個明顯跡象。細(xì)菌在培養(yǎng)基中大量繁殖會導(dǎo)致培養(yǎng)基變渾濁，就像一杯清水變成了有雜質(zhì)的渾水一樣。例如，常見的大腸桿菌污染會使培養(yǎng)基在短時間內(nèi)（通常1 - 2天）變得很渾濁。
  - 顏色變化：培養(yǎng)基的顏色也能提供線索。多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基含有pH指示劑，如酚紅。正常情況下，細(xì)胞代謝會使培養(yǎng)基的pH值發(fā)生一定變化，顏色也會相應(yīng)改變。但如果顏色變化異常，可能提示污染。比如，真菌污染可能會使培養(yǎng)基顏色變深、變黑，這是因為真菌在生長過程中會產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物改變培養(yǎng)基的成分和顏色。
  - 漂浮物或沉淀物：除了渾濁和顏色變化外，觀察培養(yǎng)基中是否有漂浮物或沉淀物也很重要。如果有白色、黑色或其他顏色的絲狀、絮狀漂浮物，可能是真菌污染。一些細(xì)菌污染也可能產(chǎn)生顆粒狀的沉淀物。例如，葡萄球菌污染可能會在培養(yǎng)基底部出現(xiàn)一些白色的沉淀小顆粒。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面
  - 在培養(yǎng)瓶的內(nèi)表面，如果出現(xiàn)菌斑、霉斑，很可能是真菌污染。這些菌斑可能是白色、黑色、綠色等不同顏色，形狀不規(guī)則，大小也不一。例如，黑曲霉污染時，在培養(yǎng)瓶壁上可以看到黑色的菌斑，而且菌斑會隨著時間逐漸擴(kuò)大。
二、顯微鏡觀察
1.低倍鏡觀察（10x - 40x）
 - 細(xì)胞形態(tài)和密度：正常細(xì)胞在顯微鏡下有特定的形態(tài)和生長方式。如果細(xì)胞形態(tài)變得不規(guī)則、腫脹、破裂或者細(xì)胞密度突然降低（排除正常的細(xì)胞凋亡等情況），可能是受到了污染。例如，當(dāng)細(xì)胞被細(xì)菌污染時，細(xì)菌產(chǎn)生的毒素可能會導(dǎo)致細(xì)胞破裂，在視野中可以看到細(xì)胞碎片增多。
  - 運(yùn)動的微生物：細(xì)菌和一些原生動物污染在低倍鏡下可以觀察到運(yùn)動的顆粒。細(xì)菌通常呈現(xiàn)小的、快速移動的顆粒狀，它們的運(yùn)動方式多樣，有的是直線運(yùn)動，有的是布朗運(yùn)動。例如，假單胞菌在視野中會快速地游動，很容易被觀察到。
2. 高倍鏡觀察（100x - 400x）
  - 細(xì)菌形態(tài)：在高倍鏡下可以更清楚地看到細(xì)菌的形態(tài)，如球菌（圓形）、桿菌（桿狀）、螺旋菌（螺旋狀）等。這有助于初步判斷污染細(xì)菌的類型。例如，金黃色葡萄球菌呈球形，多個聚集在一起像葡萄一樣；大腸桿菌則是桿狀的細(xì)菌。
  - 真菌結(jié)構(gòu)：對于真菌污染，可以看到菌絲和孢子。菌絲是絲狀的結(jié)構(gòu)，粗細(xì)不均，有分支；孢子呈圓形或橢圓形。例如，青霉菌污染時可以看到典型的掃帚狀分支的菌絲和綠色的孢子。
  - 支原體觀察：支原體比細(xì)菌小，在普通光學(xué)顯微鏡下不容易看清其形態(tài)。但在高倍鏡下，如果仔細(xì)觀察，有時可以看到一些微小的、類似油煎蛋樣的結(jié)構(gòu)（這是支原體在細(xì)胞表面生長形成的典型形態(tài)），不過這種觀察需要一定的經(jīng)驗和仔細(xì)的觀察。
三、其他檢測方法
1. 細(xì)胞生長狀態(tài)
  - 生長速度：正常細(xì)胞有一定的生長曲線，包括潛伏期、對數(shù)生長期和平臺期。如果細(xì)胞生長速度明顯變慢或者停止生長，除了考慮培養(yǎng)條件（如營養(yǎng)不足、溫度不合適等）外，也要懷疑是否有污染。例如，支原體污染會使細(xì)胞的生長速度顯著降低，因為支原體消耗細(xì)胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，并且會干擾細(xì)胞的代謝過程。
  - 代謝產(chǎn)物變化：可以通過檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的代謝產(chǎn)物來判斷是否污染。例如，乳酸脫氫酶（LDH）是一種細(xì)胞內(nèi)酶，當(dāng)細(xì)胞受到污染損傷時，LDH會釋放到培養(yǎng)基中，使上清液中LDH的含量升高。 2. 2. 檢測試劑盒
  - 支原體檢測試劑盒：由于支原體污染不易用顯微鏡觀察到，使用支原體檢測試劑盒是一種有效的檢測方法。例如，PCR - 基于檢測試劑盒可以檢測支原體的特定基因序列，熒光染色檢測試劑盒可以通過熒光標(biāo)記的抗體來識別支原體。這些試劑盒具有較高的靈敏度和特異性，能夠準(zhǔn)確地判斷細(xì)胞是否存在支原體污染。
  - 細(xì)菌和真菌檢測試劑盒：也有一些用于快速檢測細(xì)菌和真菌的試劑盒，它們通?；诳乖?/span> - 抗體反應(yīng)或者微生物的特定代謝產(chǎn)物檢測原理。這些試劑盒可以在短時間內(nèi)（如幾小時內(nèi)）給出檢測結(jié)果，幫助確定是否存在污染。