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CryoStor® CS10是一種無血清、即用型細胞凍存液,專為細胞和組織的低溫保存設計,確保細胞在冷凍和解凍過程中保持高活性和功能完整性。以下是詳細的使用說明:
1. 產品基本信息
產品名稱:CryoStor® CS10 (100-1061)
規(guī)格:通常提供 100 mL 瓶裝。
儲存條件:2°C 至 8°C 冷藏保存,避免冷凍。
有效期:見產品標簽,通常為 2 年。
2. 使用前準備
檢查外觀:確保液體清澈無沉淀,顏色為淡黃色至無色。
恢復至室溫:從冰箱取出后,靜置至室溫(約 15-30 分鐘)。
無菌操作:在超凈臺或生物安全柜中進行操作,避免污染。
3. 細胞凍存步驟
(1)細胞準備
細胞狀態(tài):確保細胞處于健康狀態(tài),活率 >90%。
細胞計數(shù):用細胞計數(shù)儀或血球計數(shù)板計數(shù),調整細胞密度至 1×10^6 至 1×10^7 cells/mL。
離心收集:將細胞懸液離心(如 300×g,5 分鐘),棄上清。
(2)重懸細胞
加入 CryoStor® CS10:根據(jù)細胞沉淀量,加入適量 CryoStor® CS10,輕輕吹打混勻。
分裝:將細胞懸液分裝至凍存管中,每管 1-2 mL。
(3)冷凍
程序降溫:
使用程序降溫盒或程序降溫儀,以-1°C/min的速率降溫至 -80°C。
若無程序降溫設備,可將凍存管放入異丙醇降溫盒,置于 -80°C 冰箱過夜。
轉移至液氮:24 小時后,將凍存管轉移至液氮罐中長期保存。
4. 細胞解凍步驟
(1)快速解凍
水浴解凍:將凍存管從液氮中取出,迅速放入 37°C 水浴,輕輕搖晃至完quan解凍(約 1-2 分鐘)。
避免過熱:解凍后立即從水浴中取出,避免高溫損傷細胞。
(2)洗滌細胞
稀釋 DMSO:將解凍的細胞懸液緩慢加入預熱的完quan培養(yǎng)基中(如 10 倍體積),輕輕混勻。
離心:300×g 離心 5 分鐘,棄上清。
重懸:用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,進行后續(xù)培養(yǎng)或實驗。
5. 注意事項
DMSO 濃度:CryoStor® CS10 含 10% DMSO,部分細胞可能對 DMSO 敏感,需優(yōu)化濃度。
無菌操作:全程避免污染,尤其是分裝和解凍步驟。
解凍速度:快速解凍以減少冰晶損傷。
細胞密度:凍存時細胞密度不宜過高或過低,推薦 1×10^6 至 1×10^7 cells/mL。
6. 適用細胞類型
干細胞:如間充質干細胞(MSCs)、造血干細胞(HSCs)。
免疫細胞:如 CAR-T 細胞、NK 細胞。
原代細胞:如肝細胞、神經(jīng)元。
細胞系:如 HEK293、CHO 細胞。
7. 常見問題解答
(1)CryoStor® CS10 是否可以稀釋?
不建議稀釋,以免影響凍存效果。若需降低 DMSO 濃度,可選擇 CryoStor® CS5(含 5% DMSO)。
(2)凍存后細胞存活率低怎么辦?
檢查細胞狀態(tài):確保凍存前細胞健康。
優(yōu)化凍存密度:調整至推薦范圍(1×10^6 至 1×10^7 cells/mL)。
檢查凍存程序:確保降溫速率和解凍速度符合要求。
(3)CryoStor® CS10 是否可以用于組織凍存?
可以,適用于小組織塊的低溫保存,但需根據(jù)組織類型優(yōu)化凍存條件。
總結
CryoStor® CS10是一款高效、無血清的細胞凍存液,適用于多種細胞類型的低溫保存。通過規(guī)范的操作步驟和注意事項,可確保細胞在冷凍和解凍過程中保持高活性和功能完整性。
STEMCELL CryoStor® CS10代理:柏萊源(天津)生物科技有限公司
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